Narodil sa 3. augusta 1942 v Bratislave. Aj pod vlyvom staršieho brata Ivana stál na javisku už ako malý, v detských úlohách v činohre Slovenského národného divadla. Vo svojich šestnástich rokoch nasledovalo krátke angažmán v Dedinskom divadle v Spišskej Novej Vsi. Po ukončení štúdia herectva na Vysokej škole múzických umení pôsobil v Divadle J. G. Tajovského vo Zvolene, Divadle SNP v Martine a napokon v Bratislave v Poetickom súbore Novej scény, ktorá sa postupne, ako sa menila jej dramaturgické orientácia, nakrátko premenovala na Komornú činohru Novej scény, neskôr na Činohru Novej scény a napokon na Hudobno-dramatický súbor Novej scény, kde Ján Mistrík pôsobí dodnes. Hosťoval aj vo viacerých divadelných projektoch mimo svoju domovskú scénu, účinkoval vo filmoch, televíznych inscenáciách, má za sebou veľa projektov v rozhlase a dabingu.